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研究人員對(duì)高壓蒸汽滅菌器滅菌效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)
更新時(shí)間:2020-09-20   點(diǎn)擊次數(shù):933次

研究人員對(duì)高壓蒸汽滅菌器滅菌效果進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)

使用高壓蒸氣滅菌器時(shí),首先應(yīng)注意在開放蒸氣的同時(shí),排除滅菌器內(nèi)的冷空氣。必須將器內(nèi)冷空氣全部排除后,才可關(guān)閉排氣孔。假如滅菌器內(nèi)仍存留有部分空氣時(shí),則壓力表上雖已達(dá)到了某一壓力值,但器內(nèi)之溫度仍未達(dá)到相應(yīng)之度數(shù)。存留的空氣越多,則二者相差也越大,器內(nèi)溫度不足,滅菌則不*。(很多人在做發(fā)酵法培養(yǎng)基滅菌時(shí)會(huì)出現(xiàn)小導(dǎo)管中有氣泡,不妨也可以嘗試多排出滅菌器內(nèi)的冷空氣,有奇效哦)。

高壓蒸氣滅菌器使物品滅菌后達(dá)到無菌要求,這是微生物實(shí)驗(yàn)的基本保證。高壓滅菌器滅菌效果是否合格是實(shí)驗(yàn)成敗的zui基礎(chǔ)zui關(guān)鍵的首要步驟。除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,不需高壓滅菌外,大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。我們必須認(rèn)真對(duì)高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證,因?yàn)閷?duì)無菌試驗(yàn)培養(yǎng)基滅菌不*,直接關(guān)系到對(duì)樣品的無菌試驗(yàn)結(jié)果。為此我們提供了進(jìn)行滅菌效果驗(yàn)證的一個(gè)簡(jiǎn)易可行的方法。




1.方法與結(jié)果

將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(以下簡(jiǎn)稱菌片)用無菌鑷子放人密封試管中?;瘜W(xué)指示卡和留點(diǎn)溫度計(jì)放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層,則需放10處。



留點(diǎn)溫度計(jì)標(biāo)化合格后方可用于驗(yàn)證試驗(yàn)。檢測(cè)前,需將溫度計(jì)的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測(cè)后留點(diǎn)溫度計(jì)的溫差應(yīng)在1℃之間,則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。



滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時(shí),觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未*滅活,細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長(zhǎng),分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時(shí)要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對(duì)照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對(duì)照。



化學(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣滅菌時(shí),由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對(duì)照色相比,可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求?;瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會(huì)變色,影響滅菌效果的觀測(cè)。



高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi),與滅菌物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗(yàn)證(滿載時(shí)不超過總體積的2/3)。二種驗(yàn)證各重復(fù)三次,共做六次。



5個(gè)點(diǎn)六次試驗(yàn)表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對(duì)照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣滅菌效果合格。



高壓滅菌器屬于強(qiáng)檢儀器,但強(qiáng)檢只是對(duì)儀器物理參數(shù)的考核。所以做過強(qiáng)檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗(yàn)證。一些單位常常忽略了這個(gè)重要的問題。國內(nèi)市售的手提滅菌器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但滅菌物品的實(shí)際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致滅菌物品不*,影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不*,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗(yàn)證是一個(gè)必須引起重視的問題。



附:滅菌時(shí)的注意事項(xiàng)(一些進(jìn)口的全自動(dòng)滅菌鍋可不用考慮排氣)


2.試驗(yàn)材料
(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(也可用成套測(cè)試管)。嗜熱脂肪芽胞桿菌(Bacillus stearothermophilus)。

ATCC7053是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-105 CFU/片。

(2) 121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡(常見的滅菌指示帶也可)。

(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基115℃高壓滅菌20分鐘后備用

(4)0-150℃留點(diǎn)溫度計(jì)(須計(jì)量局校準(zhǔn))。



 

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